TFA去除: 多肽轉(zhuǎn)換為乙酸鹽形式
為什么要去除TFA?
在多肽固相合成過程中，三氟乙酸（TFA）經(jīng)常被用來將多肽從固相樹脂上切割下來。在反相HPLC純化多肽的過程中，也會用到三氟乙酸或醋酸。但如果是用于臨床前和臨床研究中的多肽，殘留的三氟乙酸或氟化物將會是有毒的和不受歡迎的。
公司合成的多肽一般都是TFA鹽形式。如果殘留TFA會影響您的實驗，我們通常建議轉(zhuǎn)化為其他鹽，如醋酸和鹽酸鹽形式。這些鹽形式的多肽通常要比TFA鹽費用多20％至30％，這是由于在轉(zhuǎn)鹽的過程中會損失部份多肽，而且需要更多的原材料。
TFA可能會帶來很多問題。因此，我們可以去除TFA鹽，從一開始就避免他們。
TFA是一種強酸。它可以質(zhì)子化任何氨基。鹽酸也是這樣。在純化多肽過程中的反相HPLC，有一種技術(shù)是陰離子交換。將多肽加載在柱子上，保持它在頂部，同時用足量的乙酸緩沖液洗滌，然后用乙酸水溶液/乙腈作梯度洗脫。冷凍干燥后，抗衡離子TFA被交換。該技術(shù)依賴于多肽的疏水性。一個親水性高的多肽將需要一個合適的陰離子交換樹脂。
澤溪源使用一種特殊的反相C-18材料，提供了很好的分離法從而去除TFA。TFA、醋酸和氟化物的分離需用到由烷基季銨基團(tuán)功能化的固定相。來自分析柱的洗脫液流經(jīng)suppressor，降低了洗脫液的總背景電導(dǎo)，增強了分析物離子的電導(dǎo)。通過抑制電導(dǎo)，信噪比比非抑制電導(dǎo)改善了約50倍。
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